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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易微板法)

产品简介：

葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase，G-6-PD或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中

的*个酶(EC1.1.1.49)。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD被还原成NADPH，其反应公式如下：

G-6-P+NAPD+→6-PGA+L-NADPH。

在上述偶联反应中，NADPH生成速率与样本中酶活性呈正比，通过酶标仪或自劢分析

仪在340nm处检测吸光度升高速率( A/min)，升高速率( A/min)与G-6-PD活性呈正，直接计算酶的活性单位。100T该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领

域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

试剂(A):样本稀释液	30ml	-20℃避光
试剂(B): G6PD assay buffer	30ml	4℃
试剂(C): NADP	9mg	-20℃
试剂(D): G-6-P	1支	-20℃
试剂(E): G-6-P稀释液	10ml	RT

自备材料：

1、生理盐水

2、水浴锅

3、96孔板

4、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤2次，

每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为

30%的红细胞悬液，4℃保存备用。临用前，以样本稀释液稀释25倍，即为溶血液。4℃

保存10h，-20℃保存48h。

2、配制NADP储存液：取9mg NADP溶解于1ml G6PD assay buffer，充分混匀，配制

成NADP储存液(9mg/ml)，-20℃保存备用。

3、配制检测工作液：取NADP储存液和G6PD assay buffer，按NADP储存液(9mg/ml)：

G6PD assay buffer=1：49的比例混合，即为检测工作液。-20℃保存，一个月有效。4、配制G-6-P工作液：取G-6-P 1支溶解于G-6-P稀释液10ml，混匀，即为G-6-P工

作液，分装成小份后，-20℃保存备用。

5、分光光度计检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物	空白管	测定管
检测工作液(μl)(37℃预温)	220	220
G6PD assay buffer (μl)	5	－
溶血液(μl)	－	5
混匀，37℃孵育10min。
G-6-P工作液(μl)	25	25

混匀，37℃孵育60s，在340nm处1-3min各管吸光度

变化，计算各管A/min。

6、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用

量或适当稀释后再进行测定。
波长	340nm
反应温度	37℃
孵育时间	90s
连续监测时间	60s
比色杯光径	1.0cm
系数	8040
待测样品	6μl
检测工作液	264μl
G-6-P工作液	33μl

计算：

6

分光光度计计算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040

式中：6220=NADH的吸光度250=反应液的总体积(μl) 5=待测样品体积(μl)

生化分析仪计算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040

6

式中：A/min=测定的340nm吸光度的升高速率

6220=NADH的吸光度303=反应液的总体积(μl) 6=待测样品体积(μl)

参考范围：

成年健康人红细胞G6PD：8-18U/g Hb

注意事项：

1、 血清中G6PD活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。

2、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。