| 更新时间： | 2026-03-10 |
| 访问量： | 1263 |
| 厂商性质： | 生产厂家 |
本品用于分离猪脏器组织中性粒细胞
Store at: RT° C Size :2X100ml
试剂盒内容
全血及组织稀释液100ml
细胞洗涤液100ml
试剂A2X100ml
红细胞裂解液100ml
说明书1份
猪脏器组织中性粒细胞分离液试剂盒
本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是Ficoll 400与泛影酸葡甲胺。适用
于从人或各种动物血液或脏器组织中分离中性粒细胞，在医疗和医学生物学研究中广泛应
用。其他人及动物多种比重细胞分离液。注：因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及
细胞带电不同，所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细
胞的名称。
猪脏器组织分离液试剂盒系列产品目录
1.适用于人或各种动物血液及脏器组织本系列产品检索
2.相关试剂及耗材
3.注意事项
4.应用
5.产品性能指标
6.贮藏及保存期限
7.实验前准备
8.人或各种动物中性粒细胞分离液使用方法说明及图例
9.组织单细胞悬液的制备
10.红细胞裂解液使用说明
11.人或各种动物中性粒细胞分离液试剂盒使用方法说明及图例
12.生产企业
13.参考文献
1.适用于人或各种动物血液及各种动物血液及各种动物血液及脏器组织本系列产品检索：：：：
货号品牌产品名称规格报价
| LDS1091 | TBD | 马外周血单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1091P | TBD | 马脏器组织单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1091Z | TBD | 马肿瘤浸润组织单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1084Y | TBD | 羊外周血单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1084YP | TBD | 羊脏器组织单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1084YZ | TBD | 羊肿瘤浸润组织单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1079F | TBD | 鱼全血单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| LDS1079FP | TBD | 鱼脏器组织单个核细胞分离液 | 100ml | 400 |
| 干细胞分离液 | ||||
| LGS1073 | TBD | 人骨髓间充质干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1068 | TBD | 人外周血造血干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1072 | TBD | 大鼠骨髓间充质干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1072W | TBD | 大鼠外周血造血干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1081 | TBD | 小鼠骨髓间充质干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1081W | TBD | 小鼠外周血造血干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1090 | TBD | 兔骨髓间充质干细胞分离液 | 200ml | 400 |
| LGS1090W | TBD | 兔外周血造血干细胞分离液 | 200ml | 400 |
2...相关试剂2.相关试剂及耗材
A．．．．试剂
货号名称规格价格
2010C1119全血及组织稀释液500ml 400.00
2010X1118细胞洗涤液500ml 200.00
Y2013TBD组织匀浆液150ml 150.00
NH4CL2009红细胞裂解液100ml 150.00
B．．．．耗材
货号名称及规格生产厂商价格
3516 6孔细胞培养板50块/箱Costar 686.00
3513 12孔细胞培养板50块/箱Costar 675.00
3524 24孔细胞培养板100块/箱Costar 1287.00
3548 48孔细胞培养板100块/箱Costar 1542.00
3599 96孔细胞培养板100块/箱Costar 1367.00
430168 25CM细胞培养瓶(密封盖) 20个/包Corning 113.00
430639 25CM细胞培养瓶(透气盖) 20个/包Corning 132.00
430720 75CM细胞培养瓶(密封盖) 5个/包Corning 56.00
430641 75CM细胞培养瓶(透气盖) 5个/包Corning 59.00
430823 150CM细胞培养瓶(密封盖) 5个/包Corning 102.00
430825 150CM细胞培养瓶(透气盖) 5个/包Corning 107.00
431079 175CM细胞培养瓶(密封盖) 5个/包Corning 133.00
431080 175CM细胞培养瓶(透气盖) 5个/包Corning 139.00
431081 225CM细胞培养瓶(密封盖) 5个/包Corning 167.00
431082 225CM细胞培养瓶(透气盖) 5个/包Corning 176.00
430790 15ml离心管（含泡沫架）50支/包Corning 92.00
430828 50ml离心管（含泡沫架）25支/包Corning 55.00
430776 250ml离心管102支/箱Corning 1176.00
4485 1ml移液管50支/包Costar 55.00
4486 2ml移液管50支/包Costar 63.00
4487 5ml移液管50支/包Costar 92.00
430659 2ml冻存管（可立外旋）50支/包Corning 117.00
430663 5ml冻存管（可立外旋）50支/包Corning 131.00
GP2012玻璃吸管10支/包TBD 30.00
GT201210 10ml玻璃离心管10支/包TBD 90.00
GT201250 50ml玻璃离心管5支/包TBD 120.00
L147 100/200目不锈钢滤网TBD 150.00
3. ..注意事项3.注意事项
A．本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4
℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃以下易出现白色结晶，
影响分离效果。
B．待分离的血液、组织及细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一
定在20℃水浴箱中复温20分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果，
且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C．由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响
分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索*的分离条件（具体分离条件
各实验室自定）。
D．使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
E．*抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂
体积。
F．分离过程中所用其他试剂如：羟乙一基淀粉550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及
红细胞裂解液等以我公司产品为*选择，本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、
低内毒素水平且无细胞毒性，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。
4. ..应用
适用于从人或各种动物血液或脏器组织中分离中性粒细胞。
5.. . .产品性能指标
pH 7.0-7.5
渗透压280-340mOsmol/kg
内毒素≤0.5...EU/ml
无菌直接接种培养14天后培养基澄清澄明度及不溶性颗粒物每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒以上的不溶性微粒以上的不溶性微粒20粒以下，，，，
含25μm以上的不溶性微粒以上的不溶性微粒以上的不溶性微粒5粒以下
6.. . .贮藏及保存期限18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：：：：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
7. ..实验前准备7.实验前准备
A．试剂
中性粒细胞分离液(试剂盒所含试剂)、全血及组织稀释液、细胞洗涤液、红细胞裂解液、
组织匀浆液、胎牛血清
B．器材
玻璃离心管、玻璃滴管
水平转子离心机、无菌工作台
8.. . .各种动物中性粒细胞分离液各种动物中性粒细胞分离液各种动物中性粒细胞分离液使用方法说明及图例使用方法说明及图例
A．取1ml新鲜抗凝血，与全血及组织稀释液1:1混匀后小心加于1份本分离液之液面上；或取1ml组织单细胞悬液（具体制备方法详见9.组织单细胞悬液的制备）小心加于1份本分离液之液面上；
B.以500g（约1800转/分）离心25分钟(半径15cm水平转子)。
此时离心管中由上至下细胞分四层。*层；为血浆层。第二层；为环状乳白色的单个
核细胞层。第三层；；；；为略带混浊的分离液层为略带混浊的分离液层为略带混浊的分离液层（富集一定量的中性粒细胞富集一定量的中性粒细胞富集一定量的中性粒细胞）。。。。第四层；为红细胞层。弃去*层血浆层及第二层细胞，收集第三层分离液层和第四层红细胞层收集第三层分离液层和第四层红细胞层,放入含细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）10ml的试管中，充分混匀后，以500g约（1800转/分）离心30分钟。沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液（Cat#：NH4CL2009）裂解红细胞，再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需中性粒细胞。
注：A.提取率约为80%。
注
B.红细胞裂解过程详见“10.红细胞裂解液使用说明”。
血液（人）中各细胞含量参考值中各细胞含量参考值中各细胞含量参考值：：：：
男：4.0-5.5×1012/L(400-550万个/mm3)
女：3.5-5.0×1012/L(350-500万个/mm3红细胞)
新生儿：6.0-7.0×1012/L(600-700万个/mm3)
成人：4.0-10.0×109/L(4000-10000个/mm3)白细胞新生儿：15.0-20.0×109/L（15000-20000个/mm3)血小板100-300×109/L（10万-30万个/mm3)名称占白细胞总数百分比占白细胞总数百分比占白细胞总数百分比嗜中性粒细胞30%-70%嗜酸性粒细胞0.5%-5%嗜碱性粒细胞0%-1%淋巴细胞20%-40%白细胞分类计数单核细胞3%-8%
9.. . .组织单细胞悬液的制备组织单细胞悬液的制备
注：：：：A.. ..本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法，，，，酶消化法由于各实验酶消化法由于各实验酶消化法由于各实验室选取的消化
酶种类各不相同，，，，请各实验室自行选择进行试验请各实验室自行选择进行试验请各实验室自行选择进行试验。。。。
B. ..全过程及所需试剂要求无菌环境B.全过程及所需试剂要求无菌环境全过程及所需试剂要求无菌环境。。。。
剪碎法：：：：将组织块放入平皿后，加入少量组织匀浆液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5ml组织匀浆液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3 min，再用细胞洗涤液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置,待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml的单细胞悬液备用。匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70ml组织研磨器内，加入2ml组织匀浆液及20%匀浆器法胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用5ml组织匀浆液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀800rpm×2min，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置,待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml的单细胞悬液备用。细胞计数方法:细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至
盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，
对于细胞团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml×稀释倍数
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1m（高）＝0.1mm3而1ml＝1000mm3细胞计数要点：细胞计数要点：：：
A．进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离
心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分;或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
B．要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
C．取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混
匀，以求计数准确；
D．数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细
胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
E．操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
初学者易犯的错误：初学者易犯的错误：：：
A．计数前未将待测悬液吹打均匀。
B．滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
C．滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。
10.. . .红细胞裂解液使用说明红细胞裂解液使用说明
本裂解液有别于市场本裂解液有别于市场上销售的其它红细胞裂解液，，，，其配方经过本公司优化在裂解红细其配方经过本公司优化在裂解红细胞的同时不损伤并在一定程度上保护淋巴细胞(lymphocyte)胞的同时不损伤并在一定程度上保护淋巴细胞(lymphocyte) (lymphocyte)或其它有细胞核的细胞或其它有细胞核的细胞或其它有细胞核的细胞，，，，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。。。。另外，，，，本裂解液中无DNA及RNA酶，，，，配合细胞分离液使用所提细胞可广泛用于细胞培养及分子生物学实验，合细胞分离液使用所提细胞可广泛用于细胞培养及分子生物学实验，，，请广大用户从优选择请广大用户从优选择请广大用户从优选择。。。。红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于
从人或鼠等的血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的
提取及各种常规的分析和检测。
使用说明：：：：
A. ..对于组织细胞样品A.对于组织细胞样品对于组织细胞样品：：：：
a.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
b.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体
积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
c. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不
会影响后续的一些检测。
e.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心
2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀
体积的5倍。4℃离心效果更佳。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
B. ..对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤B.对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：：：：
a.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
b.对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。
c.加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
d. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
e.如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：：：：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
C. ..对于血液样品C.对于血液样品：：：：
a.取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
b.加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
c. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
e.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀
体积的5倍。4℃离心效果更佳。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：：：：对于微量或少量的血液样品，可以在*步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
D. ..对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤D.对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：：：：
a.每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
b.加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
c. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
e.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：：：：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
11.. . .人或各种动物中性粒细胞分离液试剂盒使用方法说明及图例各种动物中性粒细胞分离液试剂盒使用方法说明及图例
Store at：：：RT试剂盒规格：：：：2×100ml/Kit
试剂盒内容：全血及组织稀释液100ml
细胞洗涤液100ml
试剂A 2×100ml
红细胞裂解液100ml
说明书1份
操作方法：：：：
A．取1ml新鲜抗凝血，与全血及组织稀释液1:1混匀后小心加于1份A液之液面上；或取
1ml组织单细胞悬液（具体制备方法详见9.组织单细胞悬液的制备）小心加于1份A液
之液面上；
B.以500g（约1800转/分）离心25分钟(半径15cm水平转子)。
此时离心管中由上至下细胞分四层。*层；为血浆层。第二层；为环状乳白色的单个
核细胞层。第三层；；；；为略带混浊的分离液层为略带混浊的分离液层为略带混浊的分离液层（富集一定量的中性粒细胞富集一定量的中性粒细胞富集一定量的中性粒细胞）。。。。第四层；为红细胞层。弃去*层血浆层及第二层细胞，收集第三层分离液层和第四层红细胞层收集第三层分离液层和第四层红细胞层,放入含细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）10ml的试管中，充分混匀后，以500g约（1800转/分）离心30分钟。沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液（Cat#：NH4CL2009）裂解红细胞，再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需中性粒细胞。
注：A.提取率约为80%。注
B.红细胞裂解过程详见“10.红细胞裂解液使用说明”。
13. . . .参考文献
［1］Meier C, Middelanis J, Wasielewski B, et al. Spastic paresis after perinatal
brain damage in rats Is reduced by human cord blood mononuclear cells［J］. Pediatric
Research, 2006,59(2):244-249.
［2］Boyle AJ, Schulman SP, Hare JM , et al. Stem cell therapy for cardiac
repair:ready for the next step［J］. Circulation, 2006, 114(4):339-352.
［3］程范军,邹萍,杨汉东,等.人脐血间充质干/祖细胞诱导为心肌样细胞的实验研究［J］.
中华器官移植杂志,2003,24:220-222.
［4］Dennis JE,Charbord P.Origin and differentiation of human and murine stroma
［J］.Stem Cells,2002,20(3):205.
［5］Yu JC, Daniel TS, Ching PT, et al. Disparate mesenchyme-lineage tendencies
in mesenchymal stem cells from human bone marrow and Umbilical Cord Blood［J］. Stem
Cells, 2006,24(3) : 679-685.
［6］Compagnoli C, Roberts IAG, Kumar S, et al. Identification of mesenchymal
stem/progenitor cells in human first trimester fetal blood, liver and bone marrow
［J］. Blood, 2001,98:2396-2402.
［7］Miura M, Gronthos S, Zhao M, et al. SHED: stem cells from human exfoliated
deciduous teeth［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 2003,100:5807–5812.
［8］迟作华,张洹,何冬梅,等.脐血间充质干细胞培养条件的优化［J］.中国实用内
科杂志,2006, 26(5):372-375.
［9］向静,江德鹏,王昌铭，等.脐血单个核细胞体外培养和诱导后神经干细胞标志物
mRNA的表达［J］.重庆医科大学学报,2005 ,30 (3):352-355.
［10］孙海梅，季凤清，李荣平，等.不同培养条件下人脐血间充质干细胞的差异［J］. ***，www.tbdscience.com
2006, 10( 45 )：51-53.
［11］朱美玲，伍新尧，陈汝光，等.不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较［J］.中
国输血杂志,2002 , 15 (3):179-780.
［12］郑德先，吴克复，褚建新.现代实验血液学研究方法与技术.北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社，1999.
［13］鄂征.组织培养.北京出版社，1995.
［14］朱立平，陈学清.免疫学常用实验方法.人民军医出版社，2000.
